Tuotteet
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR -testipakkaus 2019-nCoV:lle
Odotettu käyttö
Tätä testipakkausta käytetään uuden koronaviruksen (2019-nCoV) kvalitatiiviseen havaitsemiseen käyttämällä nielunäytteitä, nenänielun näytteitä, keuhkohuuhtelunestettä ja ysköstä. Tämän tuotteen havaitsemistulos on tarkoitettu vain kliiniseen viitteeseen, eikä sitä tule käyttää ainoana todisteena kliinisessä diagnoosissa ja hoidossa. Potilaan kliinisten oireiden ja muiden laboratoriokokeiden yhteydessä suositellaan kattavaa analyysia.
Tarkastusperiaate
Pakkaus perustuu yksivaiheiseen RT-PCR-tekniikkaan. Itse asiassa vuoden 2019 uuden koronaviruksen (2019-nCoV) ORF1ab- ja N-geenit valittiin monistuksen kohdealueiksi. Spesifiset alukkeet ja fluoresoivat koettimet (N-geenikoettimet on merkitty FAM:lla ja ORF1ab-koettimet HEX:llä) on suunniteltu havaitsemaan vuoden 2019 uudentyyppistä koronavirusta RNA:lla näytteistä. Pakkaus sisältää myös endogeenisen sisäisen kontrollin havaitsemisjärjestelmän (sisäisen kontrolligeenin koetin, joka on merkitty CY5:llä) näytteenkeräyksen, RNA:n ja PCR-monistuksen prosessin seuraamiseksi, mikä vähentää vääriä negatiivisia tuloksia.
Pääkomponentit
| Komponentit | Äänenvoimakkuus()48T/Kit) |
| RT-PCR-reaktioliuos | 96 µl |
| nCOV-alukkeen TaqMan-koetinseos (ORF1ab, N-geeni, RnaseP-geeni) | 864 µl |
| Negatiivinen kontrolli | 1500 µl |
| nCOV-positiivinen kontrolli (l ORF1ab N-geeni) | 1500 µl |
Omat reagenssit: RNA:n uutto- tai puhdistusreagenssit. Negatiivinen/positiivinen kontrolli: Positiivinen kontrolli on kohdefragmentin sisältävää RNA:ta, kun taas negatiivinen kontrolli on nukleiinihappovapaata vettä. Käytön aikana niiden tulee osallistua uuttoon ja niitä tulee pitää tartuntavaarallisina. Niitä tulee käsitellä ja hävittää asiaankuuluvien määräysten mukaisesti.
Sisäinen referenssigeeni on ihmisen RnaseP-geeni.
Säilytysolosuhteet ja viimeinen käyttöpäivä
-20±5 ℃, vältä toistuvaa pakastamista ja sulattamista yli 5 kertaa, voimassa 6 kuukautta.
Sovellettava instrumentti
FAM / HEX / CY5 ja muiden monikanavaisten fluoresoivien PCR-laitteiden kanssa.
Näytteen vaatimukset
1. Soveltuvat näytetyypit: nielunäytteet, nenänielun näytteet, keuhkohuuhteluneste, yskös.
2. Näytteenotto (aseptinen tekniikka)
Nielun näyte: Pyyhi nielurisat ja nielun takaseinä kahdella näytepuikolla samanaikaisesti ja upota sitten näyteliuosta sisältävään koeputkeen.
Yskös: Kun potilas on yskäissyt syvään, kerää yskös kierrekorkkiseen koeputkeen, joka sisältää näyteliuosta; keuhkohuuhtelunestettä：Lääketieteen ammattilaisen suorittama näytteenotto. 3. Näytteiden säilytys ja kuljetus
Viruksen eristämistä ja RNA-testausta varten tarkoitetut näytteet tulee testata mahdollisimman pian. Näytteet, jotka voidaan havaita 24 tunnin kuluessa, voidaan säilyttää 4 ℃:ssa; näytteet, joita ei voida havaita 24 tunnin kuluessa,
tuntia tulee säilyttää -70 ℃:ssa tai sen kylmemmässä (jos -70 ℃:n säilytysolosuhteita ei ole, ne tulee
(säilytetään väliaikaisesti -20 ℃ jääkaapissa). Näytteiden toistuvaa pakastamista ja sulattamista kuljetuksen aikana tulee välttää. Näytteet tulee lähettää laboratorioon mahdollisimman pian keräämisen jälkeen. Jos näytteitä on kuljetettava pitkiä matkoja, suositellaan säilytystä hiilihappojäässä.
Testausmenetelmät
1 Näytteen käsittely ja RNA:n eristys (näytteen käsittelyalue)
On suositeltavaa ottaa 200 μl nestemäistä näytettä RNA-uuttoa varten. Katso uuttovaiheisiin liittyvät tiedot kaupallisten RNA-uuttopakkausten ohjeista. Sekä negatiivinen että negatiivinen
Tämän pakkauksen kontrollit olivat mukana uutossa.
2 PCR-reagenssin valmistus (reagenssin valmistusalue)
2.1 Poista kaikki komponentit pakkauksesta ja sulata ja sekoita huoneenlämmössä. Sentrifugoi 8 000 rpm:n nopeudella muutaman sekunnin ajan ennen käyttöä; laske tarvittava määrä reagensseja ja valmistellaan reaktiojärjestelmä seuraavan taulukon mukaisesti:
| Komponentit | N annosta (25 µl järjestelmä) |
| nCOV-aluke TaqMan-koetinseos | 18 µl × N |
| RT-PCR-reaktioliuos | 2 µl × N |
| *N = testattujen näytteiden lukumäärä + 1 (negatiivinen kontrolli) + 1 (nCOVpositiivinen kontrolli) | |
2.2 Sekoita komponentit huolellisesti, sentriföi hetken aikaa, jotta kaikki putken seinämällä oleva neste valuu putken pohjalle, ja jaa sitten 20 µl:n monistusjärjestelmä PCR-putkeen.
3 Näytteenotto (näytteenvalmistusalue)
Lisää 5 μl negatiivista ja positiivista kontrollia uuttamisen jälkeen. Testattavan näytteen RNA lisätään PCR-reaktioputkeen.
Sulje putki tiiviisti ja sentriföi 8 000 rpm:n nopeudella muutaman sekunnin ajan ennen sen siirtämistä monistuksen havaitsemisalueelle.
4 PCR-monistus (monistettu havaitsemisalue)
4.1 Aseta reaktioputki laitteen näytekennoon ja aseta parametrit seuraavasti:
| lava | Sykli määrä | Lämpötila(°C) | Aika | kokoelmasivusto |
| Käänteinentranskriptio | 1 | 42 | 10 minuuttia | - |
| Esidenaturointin | 1 | 95 | 1 minuutti | - |
| Sykli | 45 | 95 | 15 sekuntia | - |
| 60 | 30-luvulla | tiedonkeruu |
Laitteen tunnistuskanavan valinta: Valitse fluoresenssisignaalille FAM, HEX, CY5-kanava. Referenssifluoresenssille NONE (ei mitään) älä valitse ROX-kanavaa.
5 Tulosten analyysi (Katso asetukset kunkin laitteen kokeellisista ohjeista)
Tallenna tulokset reaktion jälkeen. Analyysin jälkeen säädä logaritmisessa kuvaajassa kuvan mukaiseksi lähtötasoa, lopputasoa ja kynnysarvoa (käyttäjä voi säätää tilanteen mukaan, lähtötaso voidaan asettaa välille 3–15 ja lopputaso 5–20). Ikkunan kynnyksellä kynnysviiva on logaritmisessa vaiheessa ja negatiivisen kontrollin monistuskäyrä on suora viiva tai kynnysviivan alapuolella.
6 Laadunvalvonta (testiin sisältyy menetelmävalvonta) Negatiivinen valvonta: Ei selvää monistuskäyrää FAM-, HEX- ja CY5-ilmaisukanaville
COV-positiivinen kontrolli: FAM- ja HEX-detektiokanavien monistuskäyrä on selvä, Ct-arvo ≤ 32, mutta CY5-kanavan monistuskäyrää ei ole;
Yllä olevat vaatimukset on täytettävä samanaikaisesti samassa kokeessa; muuten koe on virheellinen ja se on toistettava.
7 Tulosten määrittäminen.
7.1 Jos testinäytteen FAM- ja HEX-kanavissa ei ole monistuskäyrää tai Ct-arvo on > 40 ja CY5-kanavassa on monistuskäyrä, voidaan päätellä, ettei näytteessä ole vuoden 2019 uuden koronaviruksen (2019-nCoV) RNA:ta;
.2 Jos testinäytteessä on selvät monistuskäyrät FAM- ja HEX-kanavissa ja Ct-arvo on ≤40, voidaan päätellä, että näyte on positiivinen vuoden 2019 uudelle koronavirukselle (2019-nCoV).
7.3 Jos testinäytteellä on selkeä monistuskäyrä vain yhdessä FAM- tai HEX-kanavassa ja Ct-arvo on ≤40, eikä toisessa kanavassa ole monistuskäyrää, tulokset on testattava uudelleen. Jos uudelleentestauksen tulokset ovat yhdenmukaisia, näytettä voidaan pitää positiivisena uuden testin osalta.
koronavirus 2019 (2019-nCoV). Jos uusintatestitulos on negatiivinen, voidaan katsoa, että näyte on negatiivinen vuoden 2019 uuden koronaviruksen (2019-nCoV) suhteen.
Positiivinen arviointiarvo
ROC-käyrämenetelmää käytetään pakkauksen CT-referenssiarvon määrittämiseen, ja sisäisen kontrollin referenssiarvo on 40.
Testitulosten tulkinta
1. Jokainen koe on testattava negatiivisten ja positiivisten kontrollien osalta. Testitulokset voidaan määrittää vain, jos kontrollit täyttävät laadunvalvontavaatimukset.
2. Kun FAM- ja HEX-ilmaisukanavat ovat positiivisia, CY5-kanavan (sisäinen kontrollikanava) tulos voi olla negatiivinen järjestelmän kilpailun vuoksi.
3. Kun sisäisen kontrollin tulos on negatiivinen ja koeputken FAM- ja HEX-detektiokanavat ovat myös negatiivisia, se tarkoittaa, että järjestelmä on poistettu käytöstä tai toiminta on virheellinen, eli testi on virheellinen. Siksi näytteet on testattava uudelleen.
